そんな土方と共に新撰組を牽引する局長・近藤勇には鈴木伸之が配役され、身長185cmというガタイの良さや真っ直ぐな笑顔から漂う包容力と豪胆さはイメージにピッタリ。

さらに、新撰組最強と謳われた実力者・沖田総司を、無邪気な笑顔と刀を構えるクールさのギャップで表現する細田佳央太。理論派の参謀的存在である山南敬助の聡明さと仲間内からも一目置かれる凄みを鋭い瞳で浮かび上がらせる中村蒼。一匹狼で自由気ままだがという斉藤一を、漫画を踏襲したヘアースタイルなどビジュアルから雰囲気たっぷりに演じる藤原季節など、日本人に馴染みの深い新撰組の面々を実力派たちが魅力的に演じる。

そんな新撰組の初代筆頭局長として、切れる頭脳と暴力による恐怖で組を支配した最強にして最凶の男・芹沢鴨。自らの派閥を持ち、近藤や土方たちと対立するこのキーパーソンを綾野剛が演じる。濃さや地毛との混ざり具合までこだわったという赤の髪と着物という奇抜なビジュアルをものにする佇まいや、怪しげな表情から放たれる強烈なカリスマや独特の色気はさすがの一言だ。

また、土方が江戸で出会うライバル的存在として登場し、のちに京都では敵としてぶつかり合うことになる"人斬り以蔵"こと岡田以蔵役には中島健人。初挑戦とは思えない華麗な剣さばきや影を感じさせる表情で、純粋に強さを求めていた男が時代に翻弄される様を表現する。